1、普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。

2、做沙门氏菌可选择血清培养基。

(资料图)

3、药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头 2.1　药敏片的准备：购买或自制2.1.1　制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。

4、取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。

5、经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。

6、2.1.2　抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。

7、同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。

8、切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。

9、2.2　药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。

10、此稀释液即为用于做药敏试验的药液。

11、 3.1　药敏片法3.1.1　在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。

12、具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。

13、然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。

14、（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。

15、要求涂布均匀致密，直接悬液法要把菌液浓度用生理盐水或PBS调到0.5个麦氏标准再涂布均匀。

16、）3.1.2　将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。

17、为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。

18、为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。

19、3.1.3　将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

20、3.2　牛津杯法3.2.1　在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。

21、具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。

22、然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。

23、（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。

24、要求涂布均匀致密。

25、）3.2.2　以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、高10nm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，并在小管处标记各种药物名称。

26、每个平板可放4-6支小管。

27、待分钟后，分别向各小管中滴加一定数量的各种药液，勿使其外溢。

28、置37℃培养8-18小时，观察结果。

29、3.2.3　将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

30、3.3　打孔法：该法较简单，成本低，易操作，比较适用于商品药物的检测。

31、3.3.1　在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。

32、具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。

33、然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。

34、（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。

35、要求涂布均匀致密。

36、）3.3.2　以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。

37、3.3.3　加样：按不同药液加样，样品加至满而不溢为止。

38、3.3.4　将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

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